非洲猪瘟病毒核酸检测技术。
浙江省动物疫病预防控制中心，提供非瘟检测配套服务。
纳百生物。
实时荧光定量pcr是目前实验室快速检测非洲猪瘟病毒核酸的常用方法。该方法灵敏度高、特异性强，可对低病毒含量样品快速扩增出病毒特异性核酸片段，为非洲猪瘟疫情处置和精准清除提供技术支撑。非洲猪瘟荧光定量pcr检测实验室应符合生物安全要求，要进行严格分区，保证物品单向流动防止污染。
检测人员需经分子生物学检测和生物安全培训。本视频包含检测物资、准备检测注意事项三部分：
·一、检测所需物资。检测所需仪器包括二级生物安全柜、荧光定量pcr仪、金属浴或水浴锅、离心机、各量程、一页器等。有条件的实验室可配备组织研磨仪、核酸提取仪。检测所需材料包括消毒剂、酒精棉、高压灭菌袋、洁净吸收垫、离心管架、pcr管架、吸头1.5ml离心管、平血废液缸、剪刀、镊子、防护服、口罩、头套、手套等。
·二、检测。取出检测所用试剂，室温解冻后短暂离心，在生物安全柜中取灭菌的一点五毫升离心管配置比检测样品数量多出一至两个体系的量，混匀后分装。注意样品数量包含提取阴阳性对照、反映阴阳性对照、空白对照。
样本处理建议在二级生物安全柜中进行。实验前操作人员穿防护服、戴好手套、口罩等。检测前生物安全柜紫外照射三十分钟以上。安全柜台面铺设洁净吸收点，依次放入实验所需用品、全系或环境样品、混元，直接吸取一毫升纸星的离心管中备用。
所以用过的耗材放入含有消毒液的废液缸中，提取适量组织样品，放入含有一毫升pbs或生理盐水和研磨出的两毫升管中。不同样品更换剪刀、镊子。使用过的镊子浸泡入含有消毒液的废液缸中。
处理样品做好标记，组织样品放入研磨仪中匀浆。将处理样品放入金属浴或水浴锅中，六十摄氏度灭活三十分钟。从样品温度达到六十摄氏度开始计时，组织样品离心后备用。
整理实验台面对实验过程中使用的耗材表面消毒废弃物放入高压灭菌袋。生物安全柜喷洒消毒液后紫外照射三十分钟以上，人员更换工作服务处。理样品经传递窗传递至核酸提取室。根据实验室条件选取不同的提取方式，可采用自动核酸提取仪或商品化的柱式手工提取试剂盒进行核酸提取。设置提取，阴阳性对照制控提取过程。
·依据检测试剂盒说明书加入提取的核酸，盖紧管盖，清弹。
·八连管底部放入微型离心机中离心，设置反应程序。打开荧光定量PCR仪，放入反应管运行程序，反应结束后查看整体结果，预直线设定，要超过阴性对照扩增曲线的最高点，同时相交于阳性对照扩增曲线进入指数增长期的难点，或根据仪器噪声情况进行调整，结果判定时需在阴阳性对照均成立的情况下进行判定。
·每次实验结束后，将收集的废弃物放入高压灭菌锅120摄氏度灭菌30分钟，整个实验过程做好相关实验记录。
·三注意事项：
→一、带一次性乳胶手套并经常更换试剂准备室和样板处理室，应该配备生物安全柜，以防止对环境或对样品的污染。
→二、要严格防止气溶胶交叉污染。采取的措施包括使用一次性带滤芯的一夜气吸头，尽量不要用吸头吹，打液体混匀，减少在生物安全柜以外开启试剂或VVT管，禁止在荧光定量VVT结束后打开VVT管盖。
→三、实验中涉及的有毒有害及有污染的样本，即事迹应该严格遵循生物安全相关规定操作和处理。
→四、荧光VVT应该避光保存，加入反应液后应尽快上机以防VVT脆灭。
→五、所有事迹在开启之前要顺势离心。事迹配置完成后顺势离心已去除气泡。
→六、尽量不要在荧光定量VVT管上做标记。如何辨别非洲猪瘟病毒？
最近，一些地区的非洲猪瘟病毒十分活跃，有人向我发送照片和视频，询问这些猪是否感染了病毒。我认为很多人还不太了解非洲猪瘟的症状，因此今天我想分享非洲猪瘟的五大症状。
第一，高烧不退。例如，猪的体温在四点、五度、四十一度甚至四十二度，使用头孢、埃及比邻等药物无法缓解症状，这可能是病毒感染所致。
第二，猪身上发红。猪的头部、颈部和身体发红，颜色不正常。
第三，个别猪会呕吐，但这不是所有猪的前期症状。母猪和肥猪可能会出现呕吐症状，但并不是所有猪都会出现。
第四，猪的粪便中可能带有血丝，这是因为非洲猪瘟会导致肠道出血，包括死亡后口鼻出血。
第五，感染非洲猪瘟病毒的猪死亡速度较快。强毒感染的猪通常在三五天内死亡，弱毒感染的猪持续时间更长。
今年，弱毒非洲猪瘟病毒的感染也比较普遍。如果猪场出现了不正常的情况，连续出售猪，应该进行检测，以确定是否感染了小飞。此外，还应该观察周边猪场的情况，如果周边猪场出现问题，有些猪场已经进行了清宫，应该高度怀疑感染了小飞。当然，这只是怀疑，最终结果应以检测结果为准。
此外，我想提醒大家关于非洲猪瘟病毒的三点注意事项。
第一，PCR检测结果不能代表病毒的强毒或弱毒程度，只能代表感染强度的大小。
第二，带猪生产是不可取的。如果猪场感染了非洲猪瘟病毒，最终可能导致所有猪都无法存活，因此如果条件不允许拔牙，最好的方法是进行清宫。如果猪场管理良好，可以考虑拔牙。
最后，不要相信所谓的治疗非洲猪瘟病毒的特效药，以免上当受骗。
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